獨活寄生湯對兔膝骨性關節炎關節液白細胞介素-1和腫瘤壞死因數的影響
目的觀察獨活寄生湯對兔膝骨性關節炎中白細胞介素-1(IL-1) 和腫瘤壞死因數(TNF) 表達水準的影響，探討其治療骨性關節炎的機制。方法 將24只兔隨機分為2組，即對照組和治療組，各12只，24個膝關節，採用兔膝關節腔內注入木瓜蛋白酶造成骨關節炎的病理模型，以獨活寄生湯濃縮液餵食飼養，於治療後1、3、5 周分別抽取關節液，採用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)，分別測定兔膝關節液中IL-1及TNF 表達水準。結果 治療後1周，膝關節關節液中即可檢測到IL-1及TNF的表達，對照組在3周時達到高峰，5周時略有回落。治療組數值與對照組比較均見下降，1周時下降差 異無統計學意義（P＞0.05），3、5周時下降差異有統計學意義（P＜0.01，P＜0.05）。結論 獨活寄生湯能降低骨性關節炎中IL-1及TNF 的表達水準。
【關鍵字】 骨性關節炎；獨活寄生湯；白細胞介素-1；腫瘤壞死因數；
【Abstract】Objective To observe the effect of Duhuojisheng decoction on the expression of IL-1 and TNF from synovial fluid in rabbit with osteoarthritis. Methods 24 rabbits were randomly divided into control and treatment groups. There were 12 rabbits (24 articular genus) in every group. Osteoarthritis model was established by injection of caroid in articular genu intracavitary. Rabbits with osteoarthritis were interfered by Duhuojisheng decoction. The expression of IL-1 and TNF from synovial fluid in rabbit with osteoarthritis were measured by double antibody sandwich ELISA 1, 3, 5 weeks after treatment. Results There were expression of IL-1 and TNF from synovial fluid a week after treatment. Following weeks expression of IL-1 and TNF raised in control group. In 3 weeks peak appeared. Expression of IL-1 and TNF raised in treatment group decreased compared with those in control group (P<0.01, P<0.05). Conclusion Duhuojisheng decoction can depress the expression of IL-1 and TNF in osteoarthritis.Key words】Osteoarthritis; Duhuojisheng decoction; Interleukin-1; Tumor necrosis factor; Rabbit
骨關節炎是骨傷科臨床常見病、多發病，主要表現為關節疼痛、僵硬及功能障礙，其主要病理特徵是關節軟骨退變及相應炎性改變，發病較為緩慢，是一種嚴重影響老年人健康的疾病。目前，常用的治療方法有中西醫之分，西醫以服用非甾體消炎藥消炎止痛緩解症狀為主，中醫中藥則活血化瘀、通經活絡辨證施治。中醫學認為，長期勞損、血瘀氣滯、風 寒濕邪、痹阻經絡、腎虛等因素致使骨髓空虛，血氣虧損，筋骨失其所養，易於損傷，感受外邪而發為痹，故骨性關節炎為痹證，可通過補腎通絡法治療。獨活寄生湯具有祛風濕、止痹痛、益肝腎、補氣血的功效，常用於治療風濕痹痛等病症，對骨性關節炎有較好的治療作用。近年來研究發現骨性關節炎與眾多炎性因數有關，其中白細胞介素( IL-1) 及腫瘤壞死因數(TNF)是參與骨關節炎進程的重要介質。我們通過觀察兔膝關節液中IL-1 及TNF在獨活寄生湯治療前後的變化，探討獨活寄生湯治療骨性關節炎的機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及分組
4∼6個月齡健康大耳白兔24只，體質量2.5∼ 3.5 kg ，雄雌不限,華北煤炭醫學院動物中心提供，合格證號:2006-04。隨機分為對照組、治療組，各12 只。
1.2 造模方法 按照日本頭康彥等［1］的兔膝關節腔內注入木瓜蛋白酶，造成骨關節病變模型方法。將兔用戊巴比妥鈉( 30 m g/kg，靜脈注射) 麻醉後雙後腿膝關節周圍剃毛，然後用10 %異丙醇消毒皮膚，輕彎曲膝關節，經關節正中或兩側進針，將1.6%木瓜蛋白酶生理鹽水溶液 0.5 mL通過髕上韌帶注入兔膝關節腔，隔日1次，連續注射3次。
1.3 給藥 以獨活寄生湯(《備急千金要方》)為基本方配製方劑［2，3］，煎煮 40 min並濃縮，含生藥 5 g/mL，造模後2周開始，以15 mL（濃縮藥液）/kg(體質量)摻拌於食物中，每只兔分籠飼養，確保藥物全量食入。對照組用等劑量0.9%氯化鈉注射液拌食。
1.4 檢測方法 於治療後1、3、5周，抽取各組兔關節液，用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA) 檢測IL-1 及TNF含量。
1.5 統計學方法 資料用均數±標準差(±s)表示，2組各時間點數據進行兩樣本間t檢驗。2 結 果
2組關節液中IL-1及TNF水準檢測結果比較見表1。表1 2組關節液中IL-1及TNF水準檢測結果比較（略）
由表1可見，造模後3周（即治療後1周），膝關節關節液中即可檢測到IL-1及TNF的表達，對照組在3周時達到高峰，5周時略有回落。治療組數值與對照組比較均見下降，1周時下降差異無統計學意義（P>0.05），3、5周時下降差異有統計學意義（P＜0.01，P＜0.05）。
3 討 論
原發性膝骨性關節炎是中老年最常發生的慢性關節疾病，主要表現為緩慢發展的膝關節疼痛，功能障礙，勞累或受涼後加重，其病理特徵是膝關節軟骨發生退行性病變，並有骨贅形成，骨贅形成是修復和再生的結果［4］。隨著人口老齡化, 膝骨性關節炎的發病率呈明顯上升趨勢，許多患者因關節功能障礙失去活動能力，對於該病的治療目前方法很 多，但尚無根治的方法，常用的治療方法為服用非甾體消炎藥消炎止痛，中藥活血化瘀、通經活絡。非甾體消炎藥長期服用往往引起藥物副作用，且治療效果不理想，中醫中藥對該病的診斷治療有其自身的優勢。中醫學認為，膝骨性關節炎的發生主要是由於肝腎虛損，筋脈失養，加之寒濕侵襲，阻滯經絡，脈絡瘀阻，關節失 去濡潤所致。原發性膝骨性關節炎以肝腎虧虛、筋骨俱損為本，寒濕阻滯經絡為標，治療當以散寒除濕通絡、補益肝腎為主。獨活寄生湯出自《備急千金要方》，原 為治療“腎氣虛弱，臥冷濕之地當風而得腰背冷痛，或為偏枯冷痹緩弱疼痛，或腰痛攣腳重痹”而設。近代主要用該方治療痹證日久正虛邪實者，如慢性關節炎、慢 性腰腿痛等［3］。獨活寄生湯可以明顯改善膝關節骨性關節炎患者的症狀，減輕疼痛，減緩關節功能障礙。獨活寄生湯治療膝關節骨性關節炎的微觀機制是否具有抑制關節腔的炎性因數的作用，還不太清楚。本實驗觀察發現，獨活寄生湯治療後，兔病變關節關節液中IL-1及TNF含量均下降，我們認為獨活寄生湯可能通 過影響IL-1及TNF等細胞因數而對骨性關節炎起到治療作用。IL-1是一 種激素樣多肽，為發現最早的細胞因數之一。IL-1在體內的靶細胞範圍非常廣泛，不僅有淋巴細胞，還包括嗜中性細胞、纖維母細胞以及肝、胰、骨、軟骨、肌 肉等器官的細胞。在體內感染、免疫應答、外傷、炎症反應等諸多方面發揮多種功能。現已證實IL-1對骨性關節炎有著多方面的影響，它參與和影響軟骨細胞正常結構和功能的改變，促進軟骨細胞凋亡發生，降解軟骨細胞基質，參與滑膜炎性病變及影響骨代謝等［4］。正常的關節滑液中含有微量的IL-1，但骨關節炎 患者的關節滑液中IL-1的含量則異常增高。TNF是由單核巨噬細胞系統產生的一種肽類激素，是一種強有力的促炎症細胞因數，不僅對人類或動物多種腫瘤細胞有細胞毒性作用，而且是機體炎症與免疫反應的重要調節因數，它除了抗腫瘤、致熱作用外，還能促進炎細胞黏附血管壁及遊出血管外，刺激內皮細胞、巨噬細胞 釋放IL-1、黏附分子等［5］。TNF可協同白細胞介素等細胞因數共同構成炎症介質，參與炎症反應［6，7］。本實驗證實獨活寄生湯治療後1、3、5 周，IL-1及TNF的含量較對照組均下降，1周下降無統計學意義（P＞0.05），3、5周時下降差異有統計學意義（P＜0.01，P＜0.05)。實 驗結果表明，獨活寄生湯可以減少IL-1及TNF的含量，治療1周後抑制作用逐漸明顯，3周時達高峰，這就從微觀角度證實獨活寄生湯對膝關節骨性關節炎有 治療作用，這種作用可能是通過抑制炎症因數來實現的。獨活寄生湯是多種成分的混合體，有效成分眾多，其治療機制非常複雜。本實驗證實IL-1及TNF的抑製作用可能只是其治療作用的一個方面，其更詳細的作用機制還需進一步深入研究。
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